金沙江石斛内生真菌色原酮类化合物DWT001的制备与应用

色原酮类化合物DWT001的制备方法

色原酮类化合物DWT001是从金沙江石斛内生真菌Tullasnellasp.中分离得到的一种新化合物.其制备方法主要包括以下步骤:

1.发酵液的制备:将石斛内生真菌Tullasnellasp.在PDB液体培养基中25℃恒温培养5天,然后将培养基倒入发酵罐中,在25℃和160rpm条件下液体发酵一个月,获得发酵液25L.发酵培养基的组成为5%葡萄糖,0.15%蛋白胨,0.5%酵母,0.05%KH2PO4,0.05%MgSO4,余量为水.

2.萃取与浓缩:将25L发酵液减压浓缩至5L,用4L乙酸乙酯反复萃取三次,萃取液浓缩后获得浸膏136g.

3.梯度洗脱分离:采用200-300目正相硅胶柱色谱,用氯仿-甲醇(1:0-0:1)为洗脱液进行梯度洗脱,将粗浸膏分为6个粗组分(A~F).组分D(9.3g)经中压液相色谱(甲醇-水,20:80-100:0)梯度洗脱,得到9个亚组分(D1~D9).组分D3(389.0mg)经正相硅胶柱色谱石油醚-丙酮体系(8:1-0:1)梯度洗脱,得到8个亚组分(D3-1~D3-8).最终,组分D3-6经制备型HPLC(甲醇-水,40:60-44:56,流速4mL/mIn,分离时间20mIn)分离,得到化合物DWT001(3.3mg,tR=14.5mIn).

DWT001的化学结构与生物活性

经核磁共振氢谱,碳谱,HSQC谱,HMBC谱等波谱数据及质谱数据鉴定,化合物DWT001为一种新的色原酮类化合物.其结构如式(I)所示.通过微量肉汤稀释法,检测了化合物DWT001对大肠埃希菌(EscherIchIacolI)和白色念珠菌(CandIdaalbIcans)的抑制作用.结果显示,DWT001表现出较好的抗菌活性,其最小抑菌浓度(MIC)值分别为32μg/mL和64μg/mL.