结核分枝杆菌分泌的酪氨酸磷酸酶(mPTPB)通过干扰宿主巨噬细胞免疫功能促进致病.常规药物靶向细菌细胞壁合成或代谢过程,而苯乙酮化合物1(IC500.16μM)和2(IC501.37μM)能特异性阻断该毒力因子,这种机制可避免传统抗结核药的骨髓抑制和肝毒性问题.实验采用pNPP显色法证实,化合物1的抑制效率达到临床在研小分子抑制剂的3倍水平.
该化合物的生产采用阶梯式发酵工艺:
1.种子培养基含葡萄糖-蛋白胨-酵母膏体系(40g/4g/4g/L),28℃振荡培养72小时
2.转入100L发酵罐(葡萄糖220g/L),25℃静置培养40-50天
3.乙酸乙酯萃取后经硅胶柱层析,采用梯度石油醚/乙酸乙酯(5%-100%)洗脱
关键控制点在于30%洗脱组分的再纯化,需通过SephadexLH-20凝胶柱以甲醇-氯仿(1:1)二次分离,最终获得毫克级高纯产物.此工艺适合在专业医药中间体工厂进行放大生产.