采用三重培养基筛选体系可有效提高菌株分离效率:
PDA培养基(含海盐30g/L)用于模拟海洋环境
无盐PDA培养基用于筛选耐渗透压突变株
含孟加拉红的改良培养基可抑制霉菌过度生长
通过ITS序列分析(引物ITS1/ITS4)鉴定,该菌株属于格孢菌属,其特有的次级代谢通路能合成含氯取代基的azaphIlones衍生物.值得注意的是,这类海洋微生物代谢产物在常规陆地真菌中尚未见报道.
化合物生产采用四级分离纯化体系:
1.初级发酵:采用优化后的马铃薯-葡萄糖培养基(含MgCl₂13g/L),28℃静置培养45天
2.萃取浓缩:乙酸乙酯萃取3次,减压浓缩得粗浸膏
3.柱层析分离:
-正相硅胶柱(100-300目)采用梯度洗脱(甲醇/二氯甲烷1.5%→乙酸乙酯/石油醚25%)
-反相C18柱用60-70%甲醇水溶液洗脱
-SephadexLH-20凝胶柱甲醇体系纯化
4.高效液相制备:采用XBrIdgeOBDC18柱(5μm),65%甲醇水溶液最终获得纯品
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