以实施例1化合物为例,其13步合成路线中关键步骤采用创新工艺:
工艺改进点:
-第八步酚羟基脱保护采用三氯化硼/二氯甲烷体系(-78℃),收率提升至83%
-第十一步分子内环合使用DMSO/K2CO3/NaI体系,温度控制在45℃避免消旋化
-终产物纯度经HPLC-MS验证>99.5%(WelchC18柱,10mMNH4HCO3/乙腈梯度洗脱)
通过放射性标记乙酰基转移实验,测试例1结果显示:
抑制IC50对比(nM):
化合物KAT6AKAT6BKAT5选择性系数
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实施例14.26.8>5000>1190倍
阳性对照CTx-6483.15.4>5000>1612倍
AlphaScreen法(测试例2)进一步验证其对KAT6A/B的特异性结合,结合自由能计算表明吡唑甲基与Tyr760形成关键氢键网络.这种选择性源于大环结构对KAT6特有的Glu782-Pro788疏水通道的空间适配.