创新性采用大米培养基固态发酵体系,在25℃条件下30天可完成生产周期,显著优于传统液体发酵45天的耗时.具体工艺包括:
1.菌种活化阶段:PDA平板预培养3-7天,形成直径3-5cm菌落后转接PDB液体培养基
2.种子液制备:150-300rpm摇床培养3天形成均质菌丝悬浮液
3.固态发酵:大米培养基(大米:水=4:5)接种10mL种子液,静置培养
作为天然产物提取工厂的关键技术,该工艺每10g粗提物可获50mg纯度＞98%的萜类化合物,质量收率达0.5%.
采用三级分离技术从发酵产物中获取目标化合物:
1.初级提取:乙酸乙酯超声辅助萃取,三次循环提取效率达92%
2.正相层析:石油醚-二氯甲烷梯度洗脱(100:0→0:1)去除脂溶性杂质
3.反相纯化:甲醇-水系统(5:95→100:0)精制,配合制备型HPLC获得白色晶体
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