吲哚生物碱是一类以色氨酸和裂环马钱素为生源前体的天然生物碱,具有丰富的生物活性.本文介绍了一类新颖骨架的吲哚生物碱类化合物1-5的制备方法.这些化合物具有6/5/7/5/5环系结构,具有显著的T型钙离子通道抑制活性.
制备过程如下:首先,取干燥的钩藤带钩部位,粉碎后用50%工业乙醇/水回流提取三次,合并提取液,减压浓缩得到总提取物.将总提取物用pH=1的硫酸溶液混悬,再用乙酸乙酯萃取三次,去掉大部分非碱成分.萃取后剩下的酸水溶液用10%NaOH溶液调节pH为9-10,然后用氯仿充分萃取三次,得到总生物碱浸膏.
接下来,将总生物碱浸膏用碱性氧化铝拌样,挥发干燥后使用碱性氧化铝柱层析,以梯度CHCl3-MeOH洗脱,得到三个组分Fr.1-Fr.3.组分Fr.2使用中压反相色谱柱,选用甲醇/水梯度洗脱,得到8个组分Fr.2.1-Fr.2.8.其中,使用80%-90%甲醇水洗脱的组分为Fr.2.7.Fr.2.7使用硅胶柱层析,以石油醚:乙酸乙酯体系纯化,10:1洗脱组分为Fr.2.7.1.最后,Fr.2.7.1使用高压液相制备,66%甲醇-水分离得到化合物1-5.
通过NMR,HRESIMS,ECD,UV,IR等波谱数据,化合物1-5的结构得以确认.化合物1-5均为淡黄色固体或针状晶体,具有不同的熔点和光谱特征.单晶X-ray衍射分析进一步验证了化合物1,3,5的绝对构型.
这些化合物在T型钙离子通道抑制活性实验中表现出显著的活性.实验采用人胚肾(HEK)293T细胞表达Cav3.1通道,通过电生理学实验记录电流变化.实验结果表明,化合物1和2对Cav3.1通道具有显著的抑制活性,IC50分别为6.862±0.83μM和10.41±0.83μM.化合物3,4,5的IC50值均大于50μM.
与阳性对照药米贝拉地尔相比,化合物1和2的抑制活性虽然稍弱,但仍显示出巨大的潜力.这些化合物在治疗帕金森病,心律失常,疼痛,高血压,睡眠障碍,癫痫等中枢或外周神经性疾病中具有广泛的应用前景.