本合成方法的核心在于采用N-烷硫基取代异吲哚-1,3-二酮化合物作为硫代试剂,与底物DNA-Ar-O-NH-R1在含无机缓冲液的溶剂体系中反应,通过[2,3]-σ迁移重排合成on-DNA邻苯酚亚硫亚胺类化合物.
具体步骤如下:
1.准备底物与硫代试剂:底物的结构式为DNA-Ar-O-NH-R1,其中DNA为核苷酸链,Ar选自苯环,芳香环或杂环,R1可为烷基,杂烷基,环烷基等.硫代试剂为N-烷硫基取代异吲哚-1,3-二酮化合物,其结构式为通式(Ⅱ)或(Ⅲ).
2.反应体系:将底物与硫代试剂溶解于pH为7.4~10的无机缓冲液与有机溶剂的混合体系中,无机缓冲液包括磷酸缓冲盐溶液或硼酸盐缓冲液,有机溶剂可选乙腈,二甲基亚砜等.无机缓冲液与有机溶剂的体积比为(1~9):3.
3.反应条件:底物工作浓度为0.01~3.0mM,硫代试剂为50~500摩尔当量,反应温度为20~100℃,反应时间为2~24小时.通过优化反应条件,如底物浓度为0.05~1mM,硫代试剂为50~200摩尔当量,pH为7.4~8.0,温度为20~70℃,时间为3~16小时,可显著提高产率.
本合成方法具有以下显著优势:
1.条件温和:反应在接近生理条件的pH和温度下进行,对DNA破坏小,生物相容性好.
2.底物普适性高:无论底物中的R1和R2基团如何变化,均能高效合成目标化合物.
3.操作简便:反应步骤简单,适合大规模DNA编码化合物库的合成.
4.成本低廉:采用常见的无机缓冲液和有机溶剂,原料易得,降低了生产成本.
通过本方法合成的on-DNA邻苯酚亚硫亚胺类化合物,可广泛应用于DEL库的构建,同时为亚硫亚胺类化合物的药物开发提供了新的研究方向.