为了克服上述问题,β-葡萄糖苷酶交联聚集体(CLEAs)被引入红景天苷的合成中.CLEAs的制备包括以下步骤:首先,将沉降剂(如1,4-二氧六环)加入β-葡萄糖苷酶溶液中,振荡混合;然后,加入戊二醛进行交联反应;最后,通过加入硼氢化钠还原反应产物,离心收集沉淀即得CLEAs.此过程中,反应温度控制在4~6℃,pH值维持在5.0~5.5,以确保酶的最大活性.
通过优化沉降剂与酶的体积比,戊二醛浓度及交联时间等条件,β-葡萄糖苷酶CLEAs的酶活回收率可达到80%以上,显著降低了酶活损失.
红景天苷的合成分为两个阶段:CLEAs的制备和红景天苷的催化合成.在合成阶段,将β-D-葡萄糖与对羟基苯乙醇溶解于含CLEAs的缓冲溶液中,加入1-丁基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐(C4MIm·PF6),仿水溶剂(如乙酸乙酯)和1,4-二氧六环,形成反应体系.此体系中,β-D-葡萄糖与对羟基苯乙醇的摩尔比为1:1~1:3,C4MIm·PF6的酶活单位为1.3~1.6U/mL.
反应体系密封后,在48~52℃,245~255rpm的条件下反应5~9天,最终可收集到高浓度的红景天苷反应液.通过优化仿水溶剂的选择及反应条件,产物浓度可提升至21g/L以上,远高于传统方法.