通过定向改造恶臭假单胞菌(PseudomonasputIda)的代谢途径,研究人员成功构建了携带二甲苯单加氧酶XMO,苯甲醇脱氢酶BADH和苯甲醛脱氢酶BZDHH三重基因的重组大肠杆菌.初始工程菌(CGMCCNO.14930)在pH8.0磷酸缓冲体系中,以2,4-二甲基硝基苯为底物,通过氧气氧化仅实现12%转化率.采用易错PCR定向进化技术对苯甲醇脱氢酶进行改造后,获得的L163W突变体将转化效率提升至89%,产物纯度达到99.8%.该突变使酶活性中心的第163位亮氨酸替换为色氨酸,显著增强了底物结合能力.
突变菌株在40L规模反应器中展现出卓越的稳定性:
底物浓度:8-20g/L的2,4-二甲基硝基苯
细胞投料比:底物与静息细胞质量比1:0.8-2
最佳条件:30℃,pH8.5磷酸缓冲液,3L/mIn通气量
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