蛇足石杉制备包括下列步骤:
(1)提取:将生药蛇足石杉粉碎后置于提取罐中,用10-20倍量含0.5-1.5%盐酸或酒石酸水溶液,20-50℃条件下,动态搅拌提取24-48小时,得生药提取液;残渣用20-95%乙醇或水,80-100℃条件下,回流提取1-3小时,得残渣提取液;;
(2)浓缩:将步骤(1)生药提取液和残渣提取液分别浓缩至不超过原体积重量10-15%;
(3)萃取:将步骤(2)生药提取浓缩液用稀碱氨水调节PH值至8-10,用氯仿反复萃取3-6次,合并氯仿萃取液,浓缩回收氯仿,浓缩至不超过原体积重量10%;
(4)酸萃取:用1%-4%的柠檬酸或盐酸水溶液反复萃取上述步骤(3)溶液1-3次;
(5)活性炭脱色:取步骤(4)酸水萃取液,用水稀释10倍,活性炭用量为稀释后体积的1%-2%,搅拌10-30分钟,过滤得到透明液体;
(6)浓缩:将上步骤(5)溶液浓缩至不超过原体积的10%;
(7)柱层析:将步骤(6)浓缩物上硅胶柱或大孔树脂或阳离子交换树脂或聚酰胺树脂,采用洗脱用水或C1-C3的烷醇或丙酮或氯仿或甲基或乙基酯或它们任意比例的混合溶液洗脱液进行梯度洗脱,搜集高含量流份;
(8)将步骤(2)残渣提取浓缩液加2-4倍量去离子水稀释,搅拌均匀,沉降6小时,上清液16000r/min高速离心,离心液上大孔树脂或阳离子交换树脂或聚酰胺树脂,采用洗脱用水或C1-C3的烷醇或它们任意比例的混合溶液进行梯度洗脱,搜集高含量流份;
(9)将上述(7)(8)溜份合并浓缩至原体积的10-20%,将浓缩液送至真空冷冻机中冷冻干燥或喷雾干燥或真空干燥,得蛇足石杉提取物.
蛇足杉提取物含总生物碱以重量%表示为30%-99%(w/w).在该总生物碱中,包括石杉碱甲(HuperzineA)和石杉碱乙(HuperzineB),还包括石杉碱丙(HuperzineC),石杉碱丁(HuperzineD),石杉碱戊(HuperzineE),石杉碱己(HuperzineF),石杉碱庚(HuperzineG),6-β-羟基石杉碱甲(6-β-hydroxyhuperzineA),蛇足石衫碱(Huperzinine),石松灵碱(Lycodoline),石松宁碱(Lycodavine),山芝宁碱(Serratinine),山芝亭碱(Serratine),8-去氧山芝宁碱(8-Deoxyserratinine),马尾杉碱N(PhlegmariurineN)成分中的一种或多种,其中石杉碱甲和石杉碱乙的总含量以重量%表示为75%-99%.
该提取物中除含总生物碱之外,还含有高良姜素(Galangin),山柰酚(Kaempferol),槲皮素(Quercetin),芹草素(Apigenin),芫花素(Genkwanin),木犀草素(Luteolin)和牡荆素(Vitexin),山芝稀二醇(Serratenediol),山芝稀三醇(Serratriol),山芝三醇(Tohogenol),21-表千层塔烯二醇(21-epi-Serratenediol)成份中的一种或多种.
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