报道一,
在250ml三角瓶中装入50ml培养基,其中,含牛肉膏1%,蛋白胨1%,酵母膏0.5%,NaCl 0.5%,pH 7.0,于118℃灭菌30min,冷却后接入乙酰短杆菌QD96,于30℃振荡(200r/min)培养16h,将培养液经4000r/min冷冻离心30min,再用0.05mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.0)洗涤,再离心,所得之菌体冷藏保存,作为核苷酸磷酸化酶备用.
在100ml圆底烧瓶中,装入50ml底物溶液,其中含鸟苷酸和胸苷浓度各为40mol/L,磷酸缓冲液为25mmol/L,菌体加入量为5%(湿重),在恒温水浴中60℃搅拌反应2h,反应完毕,冷冻离心去除菌体和少量胸腺嘧啶沉淀物.然后将溶液经HPLC检测其中含24mmol/L脱氧鸟苷,其转化率达60%.经阴离子交换树脂分离,可获得0.26g脱氧鸟苷.
报道二,
1)产酶菌体的收集与预处理
产酶菌株发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum) CGMCC 1.1880在上述公知的 产酶培养条件下进行繁殖生长并富产脱氧核苷核糖转移酶,得1升产酶发酵液,采用离心 (离心条件:6000转/分钟,离心20分钟),收集得到57克菌体浆状物,然后用500毫升去离子 水将菌体重新制成菌悬液并搅拌10分钟进行洗涤菌体,然后再上述相同的离心条件离心收 集菌体,得到53克洗涤后的菌体浆状物.然后用1升0.5M磷酸缓冲液(pH8.0)洗涤,再经同样 条件离心得到50克菌体浆状物.该菌体浆状物即为制备2’-脱氧鸟苷的生物催化剂.
2)生物催化合成2’-脱氧鸟苷
先在2升反应器将用800毫升去离子水使25克聚乙醇10000(PEG 10000)溶解完全, 然后一边搅拌一边加入30克磷酸二氢钾,溶解完全后,加入16.5克β-胸苷和10.3克鸟嘌呤, 搅拌混合均匀.然后再加入步骤1)所得到50克菌体浆状物,同样搅拌使菌体分撒均匀.接着 用去离子水定容至1升,最后用5M氢氧化钾溶液将转化体系的pH值调至8.0.pH值调节完毕 后,置于水浴中,将反应温度升至40℃进行生物催化反应,反应过程中一直搅拌.反应36小 时后,取样测定β-胸苷转化率和产物2’-脱氧鸟苷产率.测定方法采用高效液相色谱法 (HPLC),其检测方法如下所示:
色谱柱:Diamonsil C18,5um, 250 x 4.6mm;流动相:甲醇:0.02mol磷酸钾缓冲盐= 20:80;流速:0.8ml/min;检测波长:254nm
HPLC分析结果显示,β-胸苷转化率为72%,产物2’-脱氧鸟苷产率为13.1 g/L.
产品链接: CAS No. 312693-72-4››联系我们可以获取更多内容.
如有产品相关项目调研或推广服务, 请致函联系我们